医薬
業界別 受託事例

ご提供いただく資料を基に、指定の化合物の合成を順次行う。 各化合物の合成量の目標値は100 mgとする。

抗体作製のための抗原として、リン酸化ペプチド及び同配列の非リン酸化ペプチドを合成する。マレインイミド化KHLとコンジュゲーションのため、Cys残基を末端に配置し、N末端はアセチル化する。

酵素活性阻害ペプチドとして、環状ペプチドを合成する。N末端のアミノ基とC末端のカルボン酸をペプチド結合で結合させた環状ペプチドの他、Cys残基側鎖を利用したチオエーテル型環状ペプチドを合成する。

酵素活性阻害ペプチドのC末端側に特定の長さのリンカーを介してデキサメタゾンをコンジュゲーションさせたペプチドを合成する。

指定された遺伝子のアミノ酸コード領域をcDNAからPCR増幅し、N末端にMyc-tagを付加した状態で哺乳類用発現ベクタープラスミドに挿入する。挿入配列を確認後、Mini-prepサイズのプラスミドを提出する。

指定の遺伝子を機能不全にさせるよう切断するguide RNAを3種類設計し、その切断効率を細胞を用いて評価する。最も切断効率の良かった guide RNA と Cas9 を発現するプラスミドを調製し、提出する。

ご提供いただく基本レンチウイルス調製用プラスミドにshRNA/siRNA配列を導入し、プラスミドを提出する。

哺乳類細胞において発現させたい遺伝子をご指定いただき、目的用途に適したレンチウイルス調製プラスミドを設計・構築する。そのプラスミドを用いて、レンチウイルスを調製し、提出する。

293系浮遊細胞 (30mL x 6)　にアデノ随伴ウイルス調製用のプラスミドを導入し、72時間振盪培養後、培養細胞の細胞質からAAV粒子を回収する。qPCRによるAAVゲノム測定により、ウイルス量を算定する。

発現させたい遺伝子を元にアデノウイルス調製用コスミドを設計・構築する。このコスミドを用いてアデノウイルスを調製し、力価測定結果と共に提出する。

哺乳類細胞において発現させたい遺伝子をご指定いただき、目的用途に適した強制発現用プラスミドを設計・構築する。そのプラスミドをご提供いただいた細胞へ導入し、薬剤選択、クローン化を行い、Realtime RT-PCRによって導入遺伝子の発現を確認する。発現を確認できた細胞クローンを提出する。

感染細胞にてshRNAを発現させる12種類のレンチウイルスベクター (試験委託者より提供)をそれぞれ、細胞株に感染させ、薬剤選択した (ベクターが安定導入された) 細胞を提出する。

指定の遺伝子を機能不全にさせるよう切断するguide RNAを3種類設計し、その切断効率を細胞を用いて評価する。最も切断効率の良かった guide RNA と Cas9 を発現するプラスミドを調製し、細胞に導入後、安定導入されたクローンを単離する。各クローンについてターゲット領域のゲノム配列を確認し、ノックアウトされたと考えられるクローンを提出する。

DSF（示差走査フルオロメトリー）を用い、10種類のバッファー条件（pH、塩濃度、各種添加剤等）におけるタンパク質の変性温度Tmを測定し、最も熱安定なバッファー条件（保存に適するバッファー条件）を検討する。

SPR (表面プラズモン共鳴法)を用い、1種類の受容体をリガンド、6種類のタンパク質をアナライトとして5濃度条件での相互作用をセンサーチップ上で測定する。1:1-bindingモデル及び、必要に応じてbivalentもしくはtwo stateモデルを用い、それぞれの相互作用の速度定数（ka, kd）及び平衡定数（KD）を算出する。

ヒトおよび齧歯類のペプチド分解酵素Aについて、3種類の蛍光基質ペプチドを用いた、基質分解活性測定系を確立する。確立した系を用いて、既知の阻害剤の効果を評価する。

タンパク質を96種各種沈殿剤存在下、Sitting-drop蒸気拡散法にて結晶化する。結晶が見られた条件について、24-well plate上でのHanging-drop蒸気拡散法を用いて展開する。結晶が得られた場合、メチレンブルー染色によってタンパク質結晶か、塩の結晶かを判定する。同一条件にて十分な数と質の結晶が得られた場合、クライオプロテクタントの検討を行う。

性質の異なる培養ディッシュ上での、肺癌細胞株の薬剤応答性 (細胞増殖) を評価する。素材が異なる3種類の培養ディッシュ上に肺癌細胞株を播種し、2種類の薬剤の希釈系列をそれぞれ添加する。薬剤添加48時間後に細胞数を評価するためのMTSアッセイを行い、それぞれの培養ディッシュにおけるそれぞれの薬剤のIC50を求める。同様の実験を異なる日に行い、数値の再現性を評価する。

4種類の導入試薬を用いて、各種条件でヒト癌細胞株に核酸を導入する。導入24、48時間後に細胞からRNAを抽出し、標的遺伝子の発現量をReal-time RT-PCRで定量的に評価する。

ご提供いただく細胞株に各種被験物質を添加し、一定時間後におけるリン酸化された標的受容体タンパク質をELISAにて測定する。

マウス胎児の大脳皮質より、神経細胞およびアストロサイトを単離し、初代培養する。神経細胞、アストロサイトのマーカーを、それぞれ、MAP2およびGFAPとし、そのタンパク質発現を蛍光免疫染色により確認する。神経細胞/アストロサイト共培養において、被験物質添加後の代謝関連物質 (ATP等) の濃度を測定する。

培養したヒトiPSC由来或いは齧歯類の中枢神経培養系に、核酸医薬や化合物など被験物質を添加し、MEA機器により細胞外活動電位を計測する。ニューロンの作動性、神経毒性、イオンチャンネル/受容体の反応プロファイル等、スクリーニングに必要な条件を設定する。スパイクデータをもとに多変量解析を行い、被験物質のプロファイルから設定条件に適合する化合物を選択する。

ヒトiPSC或いは齧歯類の感覚神経DRGを培養し、被験物質やTRP受容体に特異的な陽性対照化合物を添加し、神経毒性、標的のTRP受容体を評価する。

ターゲットタンパク質のどの部分にペプチドが結合するかを予測する。
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ペプチドのタンパク質へのドッキングおよび結合親和性の予測を行う。
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タンパク質＋ペプチド＋水の系の分子動力学計算とMMGBSAによる結合親和性の予測を行う。
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384-well plate上でタンパク質Aとタンパク質Bの相互作用をTR-FRET/AlphaScreenにより測定する系を設計し、その反応測定条件を最適化する。

任意のタンパク質との結合を検出するため、コムギ無細胞系を用いて384-well plate上で1,000種類のタンパク質を合成する。AlphaScreenを用いたタンパク質間相互作用測定系を構築し、結合タンパク質を同定する。

目的とする増殖因子のセルリポーターアッセイ系を構築する。増殖因子の下流シグナルレスポンスエレメント (プロモーター) とルシフェラーゼから構成されるレポータープラスミドを構築する。プラスミドをご提供いただいた細胞へ導入し、薬剤選択、クローン化を行う。各細胞クローンについて、増殖因子を添加し、ルシフェラーゼの発現上昇を確認し、適切な応答を示す細胞クローンを提出する。

既に確立されたキナーゼ活性評価系を使用し、16種類の化合物について、60種類のキナーゼに対する阻害能を評価する。1536-well plate上に段階希釈し分注された化合物にキナーゼ溶液を添加し、キナーゼ活性によって生じる化学発光をプレートリーダーで測定する。得られた測定値より、各化合物の各キナーゼに対するIC50を算出する。

目的受容体シグナルが活性化されるとルシフェラーゼを発現するセルベースアッセイ系を利用し、ご提供いただく25種類のペプチドについて、目的受容体に対するアゴニスト活性を評価する。

市販のGABAB受容体のリポーター細胞株とキットを用い、250種類の被験物質のGABABレセプターに対するアゴニスト活性を評価した。

反応および測定を至適化したタンパク質-核酸相互作用を評価するHTRF/AlphaScreenアッセイ系を用いて、ご提供いただく約50万種類の化合物 (1536-well plateに分注済み)の HTRF/AlphaScreen測定を行う。

はじめに培養細胞を用いたin vitro試験で数十種類の人工核酸を作用させ、標的遺伝子のmRNA解析を実施し、ノックダウン効果が高いものを選別する。次にマウスを用いたをin vivo試験で、投与量、投与回数、期間を検討し、標的臓器における標的遺伝子のノックダウン効率および毒性を解析する。最適な投与条件を決定後、個体数を増やし、標的遺伝子のノックダウン効率とそれに伴う表現型を解析する。

タンパク質Aおよびタンパク質Bを昆虫細胞 (バキュロウイルス) およびコムギ無細胞発現系を用いて調製する。A-Bの結合を検出するAlphaScreen系を設計し、至適反応条件を検討する。

ご提供いただくファージ/大腸菌ライブラリー、抗原について (ライブラリーと抗原の組合せは9種類)、パンニングを5回行い、抗原に反応する抗体を発現するファージを濃縮する。濃縮過程での抗原への反応性をELISAを用いて評価するとともに、過程毎のライブラリーをプラスミドDNAとして調製する

抗体を断片化し、露出したCys 残基を介したチオールカップリングによってタンパク質をコンジュゲートする一連の流れにおいて、断片化の反応条件、還元剤の種類及び濃度、コンジュゲート条件の各ステップを最適化する。