受託サービス | 実績紹介

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、生成される活性酸素種 (ROS) の量をDCFDA/H2DCFDA-Cellular ROS Assay Kitを用いて評価した。

被験物質を培養細胞に添加した際の食欲関連因子の分泌促進効果を調べた。食欲関連因子はAlphaLISAにて測定した。同時に、被験物質を培養細胞に添加した際の細胞傷害性を測定した。

大腸菌発現系：元のプロトコールを改善して目的タンパク質の発現量を向上させるため、発現培養条件検討を実施し、そこで決定した条件に基づき、最終精製品として1 mgを取得するのに必要な3 Lスケールの発現培養および大量精製を実施した。その結果、イオン交換クロマトグラフィーおよびゲルろ過クロマトグラフィーのクロマトグラムが改善され、予定通りの収量で目的タンパク質を取得した。また、菌体破砕条件についても検討し、改善された同様の品質でさらに最終精製品の収量を向上させる方法も確立した。
昆虫細胞発現系：5種類のタンパク質について昆虫細胞発現系での発現培養条件検討を実施した。その結果、不溶性画分への局在が確認されたため、可溶化条件検討を実施した。また、2種類については発現培養と同時にビオチン化可能かどうかも検討し、ウェスタンブロット解析でビオチン化されていることを確認した。
SPR解析：精製した1種類のタンパク質について、2種類のリガンドを用いたビアコアによるSPR解析を実施した。

評価対象器具に対して親和性のあるペプチド配列をファージディスプレイ法により同定することを目的とした。11種類の評価対象器具それぞれに対して、ランダムなペプチド配列を含有/提示するファージライブラリーをインキュベートし、その後、洗浄することを繰り返し、親和性を示すペプチド配列を含有/提示するファージを選別した。そして、選別されたファージの配列解析を行い、親和性を示すペプチド配列を同定した。

お客様よりいただいたマイクロ流路チップに細胞懸濁液を流し、流路内に細胞が残留するかどうかを評価した。マイクロ流路は合計14枚使用した。細胞は蛍光標識し、流路内の細胞の蛍光像を顕微鏡で取得し、解析した。

指定された25種類のペプチドを自社合成した。また、特定の受容体シグナルをルシフェラーゼ活性量として評価可能なレポータ細胞でシグナル評価系を構築した。96-well plateに播種したレポータ細胞を用いて、その25種類のペプチドについて、多段階の濃度条件下で受容体アンタゴニスト活性を評価した。使用した評価系については、最終的な目的を考慮して、テクノプロ側からお客様に提案した。

ターゲットタンパク質のどの部分にペプチドが結合するかを予測する。（freesoftware、Commercial software）

ペプチドのタンパク質へのドッキングおよび結合親和性の予測を行う。（freesoftware、Commercial software）

タンパク質＋ペプチド＋水の系の分子動力学計算とMMGBSAによる結合親和性の予測を行う。（freesoftware、Commercial software）

指定化合物のサンプルを合成した。そして、その他の反応条件の検討を実施。

機能性高分子材料の研究開発の方向性の判断材料とするために、高分子材料に関する既存技術のベンチマーク調査を行った。市販材料、特許、論文を調査し、各技術の特徴について整理した。市販材料のカタログ値、特許や論文から収集した物性値については、マッピングを行った。

CRISPR/Cas9システムと開発中の遺伝子編集システム、それぞれを用いて、哺乳類細胞のHPRT1遺伝子を遺伝子編集（ノックアウト）した。それら細胞を用いて、HATアッセイを行い、変異体出現頻度から、CRISPR/Cas9システムと開発中のシステムとの遺伝子編集効率を比較した。

ヒト血液検体から各種キット等を用いて、特定の細胞種を分離したうえ、開発中の測定機器でそれらを測定し、データを取得した。FTEとして、委託者の要望に応じて、選別細胞種を臨機応変に変更しながら、継続的に実施した。

被験物質がブルーライトからの保護効果を有するかを検討するために、正常ヒト成人皮膚由来繊維芽細胞および正常ヒト成人表皮由来角化細胞を用いて、LED照射実験を行った。LED照射下で、被験物質が細胞増殖やサイトカイン産生に与える影響を検討した。

食品原材料から抽出した分離画分5種が保湿効果を示す可能性があるか検討するために、正常成人皮膚由来線維芽細胞のコラーゲン産生に与える影響を、培養上清を用いたELISAにより検討した。

がん免疫療法における有効成分を封入した微粒子製剤を調製し、得られた微粒子製剤について、各種分光学的手法 (UV-Visスペクトル測定、HPLC、DLS等) を用いて解析を行った。また、調製した微粒子製剤を培養細胞へ導入し、in vitro評価を行った。
FTEとして、委託者の要望に応じて、試験条件を臨機応変に変更しながら、継続的に実施した。

対象となるタンパク質について、その最適な保存条件の選定を目的に、各種緩衝液および添加物存在条件下での安定性をDSF（Differential Scanning Fluorimetry）の手法を用いて検証した。アッセイの第一段階として、pH、塩濃度、あるいは塩の種類などを変化させた96条件の緩衝液でタンパク質を希釈し、昇温に対する蛍光強度の変化に基づいて各条件下における変性温度(Tm)を決定した。第二段階として、Tmに基づき最も安定性に優れると判断された緩衝液1条件にタンパク質を希釈し、これに96条件の添加物を加えて、第一段階と同様にTmを決定した。試験の結果、4条件の添加物存在下において、緩衝液のみと比較してTmが上昇したことから、これらを保存条件候補として提案した。

構造生成（低分子およびペプチド）とタンパク質との相互作用スコアに関連するAI導入コンサルティングで、導入からモデル作成までを支援する。

特許を参考に、ポリマーA誘導体の合成方法の検討及び合成を行った。

政府や公的機関の発行する白書、報告書、研究開発戦略、論文や特許といった技術文献、各企業の研究開発動向等の公開情報を調査した。高分子材料の現在の課題、将来ニーズを整理して、研究開発のターゲットとする用途を提案した。

メラノサイトに植物エキスを添加し、メラニン量を測定することでメラニン産生抑制効果を評価した。

委託者が開発中の臨床検査機器を搬入・設置し、SOPを整備したうえ、人工血液を使用して海外申請用データを取得した。

抗体医薬の開発において、発現ベクター、発現方法および精製方法の改良を行い不安定な構造の目的タンパクの精製に成功した。原料(培養上清)には凝集体を含む雑多な夾雑タンパク質が含まれていることが観察され、この除去をゲルろ過で行うことを提案されていた。しかし、ゲルろ過工程では想定以上の原料が必要となり、また、提出する精製抗体の濃度が低くなること、さらには実際のゲルろ過工程で目的タンパクの分解が観察され目的タンパク質の提出は出来なかった。そこで、目的タンパク質である4量体の新たな精製方法を検討した。その結果、アフィニティ精製時の使用カラムおよび溶出条件、その後の凝集体分解処理方法の開発、透析による夾雑タンパク質の除去方法の開発に成功し、高濃度の精製タンパク質を提出できた。また本組換え抗体は大変不安定であることが判明し、構造の改良を行うことを提案した。

ある種のキノコから水溶性多糖類を抽出し、各種クロマトグラム及び沈殿法を用いて目的多糖類を精製した。精製した多糖類にある官能基を有機合成的手法で導入した。

ヒトiPSCニューロンに被験物質を作用させ微小電極アレイMEAにより細胞外活動電位の変化を測定した。多種の神経作動物質を対照として人工知能ＡＩ及び多変量解析により、中枢神経毒性におけるプロファイルを評価した。また、人工知能AIにより標的イオンチャネル/受容体の推定を実施した。

７種類の基材に対してペルオキシダーゼ標識抗体を用いたタンパク質吸着試験を実施した。1cm角に裁断された各基材を24-well plateの各ellに1枚ずつ入れ抗体液に浸漬した。浸漬時間を4種類設け、各浸漬時間におけるタンパク質吸着量を測定した。

予測ツールを検証するため、予測値と実測値の差と様々なディスクリプターの関連性を調査する。
調査のためには、公的データベースから取得可能なすべてのディスクリプターを取得する必要があるが、データベースごとにデータ形式が異なり、数値データや記述データを抽出する作業が煩雑になっているため、これらを整理して可視化する。

指定のレシピで無機有機ハイブリッドコート剤のラボスケール合成を2バッチ実施した。

豊富な表面処理加工技術の知見をもとに、高分子材料の表面処理に関する技術相談に応じた。毎週１回のミーティングでは、簡易な技術調査を踏まえて材料やプロセスを提案し、委託者での実験結果に対する提言を行った。

4種類の被験物質をハムスター皮脂腺細胞培養系に添加し、その後の皮脂合成量をオイルレッドO染色と波長520nmの吸光度により評価した。

複合体を形成するヒト由来のタンパク質3種類を大腸菌において発現させるベクタープラスミドを構築した。それらを大腸菌に導入し、ヘテロ三量体として共発現させた。ニッケルアフィニティ精製、陰イオン交換カラム精製、ゲルろ過クロマトグラフィーを行い、シングルピークの高純度三量体タンパク質を精製した。

測定機器の性能評価を目的として、試験委託者より提供いただいたヒト検体を指定の測定機器で測定し、データを収集した。また、手作業でのデータ測定、フローサイトメトリーでのマーカー測定・解析を実施し、結果を提出した。

3種類の種属特異的に検出し、それ以外の 10種類以上の種属を検出しないような Real-time PCR probe を設計した。作成したprobe と primer、template DNAを用いてReal-time PCR (qPCR) を実施し、目的の3種属のみが検出されることを確認した。

マウス間葉系幹細胞(mMSC)へのセンダイウイルス感染により6種類のヒトタンパク質遺伝子を発現させ、その発現を確認することを目的とした。
センダイウイルスは試験委託者からご提供頂き、mMSCの培養、ウイルス感染、発現解析を実施した。
まず、24 well plateで培養したmMSCにEYFP発現用コントロールセンダイウイルスをMOI=3および10で感染させ、感染条件の検討を実施した。細胞をウイルスフリー化し、核をHoechstで染色し、共焦点イメージサイトメーター CQ1によりEYFPの発現を指標に感染効率を解析した。また、増殖速度についても測定した。
次に、6種類の目的遺伝子を発現させるためのセンダイウイルスをmMSCに感染させ、薬剤選択後、発現させたタンパク質に対する抗体を用いて、CQ1およびフローサイトメーターにより発現解析を行い、細胞膜や細胞内に発現していることを確認した。

果実種子抽出物のある特定成分を逆相HPLCを用いて定量した。また当該成分を別の化学分析に供するため、98％以上で精製した。

NGS解析を委託して得たデータを用いて、クラスタリング等の二次解析・可視化を行う。

市販品から類縁化合物を推測し、合成ルート探索及び、合成を実施した。

植物性由来の機能性タンパク質の抽出・精製法や機能性評価方法に関する情報について文献・特許を調査し、提供した。

細胞Aの増殖活性を指標にした被験物質Iの生理活性評価系の構築を行った。細胞の播種数、被験物質の添加濃度、培養期間の検討を行い、それぞれについての至適条件を決定した。また、細胞Bの酵素活性を指標にした被験物質IIの生理活性評価系の構築を行った。細胞の播種数、被験物質の添加濃度、培養期間の検討を行い、それぞれについての至適条件を決定した。

タンパク質A-タンパク質Bの結合をHTRFにより測定するアッセイ系を構築するため、大腸菌発現系でGST標識タンパク質Aを発現、精製した。精製したタンパク質Aを各種バッファーに溶解させ、市販品のタンパク質Bと組合せ、HTRFでの反応条件を至適化し、HTSの実施を前提としたアッセイ系を確立した。

皮膚線維芽細胞の老化モデルを作製し、標的遺伝子発現量をリアルタイムPCR (qPCR) にて正常細胞と比較した。

キノコを熱水抽出して、水溶性β-グルカンを精製した。得られたβ-グルカンに有機合成の手法でリン酸基を導入し、リン酸導入量を算出して提出した。

デバイスに固相化する予定のタンパク質2種類について、温度条件を振って14日間の保存を行った。保存過程における各タンパク質の経時的な活性低下をELISA及び既知の酵素活性測定系によって追跡した。試験に用いる温度条件は、24時間の先行試験を参考とし、Arrhenius plotによって決定した。

製造メーカーの異なる生体高分子分析カラムの互換性を検証した。
基準物質を用いて分離能の差を検証した後、生体高分子の検体を分析と同時に分画し、カラム間での差異を評価した。また、分画サンプルは、分光学的手法により溶出量を算出し、カラム間での吸着量の差を比較した。

化学反応の制御に対する委託者指定の機器の効果を検証することを目的とし、新しい反応系の構築の為の調査・実験・検討を行った。

機能性表示食品の届出に必要とされる、目的の機能性成分の臨床試験に関する文献を調査した。

プロモーター、転写促進因子を各種組合わせ、魚類細胞において目的タンパク質を発現するプラスミドベクターを9種類、設計・作製し、提出した。

タンパク質A-核酸Bの相互作用をHTRFにより測定するアッセイ系で一次選抜された1600種類の阻害候補化合物について、阻害作用の濃度依存性を検討するため、各化合物が16段階の量で分注された1536-well plateを用いて、HTRFの測定を行った。

提供いただいたファージ/大腸菌ライブラリー、抗原について (ライブラリーと抗原の組合せは9種類)、パンニングを5回行い、抗原に反応する抗体を発現するファージを濃縮した。濃縮過程での抗原への反応性をELISAを用いて評価するとともに、過程毎のライブラリーをプラスミドDNAとして調製した。

His-tag標識されたタンパク質Aと細胞抽出液を混合後、ニッケル・セファロースビーズでタンパク質Aをプルダウンした。プルダウン後のビーズ抽出液について、SDS-PAGEを行い、タンパク質Aと相互作用すると考えられるタンパク質Bおよびタンパク質Cに対する抗体を用いてウエスタンブロットを行い、タンパク質A、B、Cの物理的相互作用を解析した。

1工数のFTE試験として、下記 ①～③ の内容を委託者のご要望に沿ったかたちで実施した。
① ファージディスプレイにおけるパンニングの実施と濃縮過程のライブラリーDNAの調製、② 細胞からの抗体遺伝子のクローニングとプラスミドベクターの構築、③ ハイブリドーマの培養上清からの抗体の簡易精製と純度確認

出芽酵母内でDNA断片をつなぎ合わせ、感染力を欠失させたウイルスのゲノム (>20kb) をプラスミドとして構築した (ウイルスベクタープラスミド)。その後、酵母からDNAを抽出し、それを元に大腸菌を形質転換させ、ウイルスベクタープラスミドを抽出、精製した。

提供されたラット細胞のRNA (cDNA) から、Immunoglobulin heavy chain および light chain の variable region をPCR増幅し、それぞれの variable region の配列を同定した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で過酸化水素を添加し、培地交換後、DCFDA/H2DCFDA-Cellular ROS Assay Kitを用いて、過酸化水素の細胞透過度を評価した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、産生されるプロスタグランジンE2 (PGE2) の量をELISAを用いて評価した。

提供いただいた9種類の培養器具のそれぞれについて、タンパク質吸着試験、エンドトキシン試験、細胞接着試験を実施した。

プローブ 4 種類、陽性対照プローブ 1 種類を調製し、ゲノム DNA 1 検体を対象としたサザンブロット解析を実施し、4 種類のプローブによる検出の可否を評価した。プローブ 2 種類については、ゲノム DNA 中に対応配列がないため、それぞれ対応するプラスミドをゲノム DNA に混合することにより、プラスミド由来のシグナルを検出した。

哺乳類細胞において、シグナルAに応答する配列の制御下でヒト分泌性アルカリ性フォスファターゼ (SEAP) を発現させるプラスミドベクターを構築した。そのプラスミドを細胞へ導入し、安定導入された細胞を樹立した。樹立した細胞について、シグナルAを活性化させる刺激を与え、分泌されるSEAPの活性を蛍光測定により評価した。

マウスの大脳皮質から神経細胞およびアストロサイトを単離、共培養した。被験物質添加後の各種代謝量を測定し、代謝評価系として機能することを確認した。

SELEXにより標的ペプチドを認識するアプタマーのスクリーニングを行い、次世代シークエンスにより塩基配列を決定した。

ある癌においては、タンパク質Dの発現と、Dの受容体である膜タンパク質Aの細胞膜への発現量が増加している。膜タンパク質Aの細胞膜上の発現量を定量する方法を確立するために、細胞膜上のタンパク質をビオチン化し、ビオチン化タンパク質をアビジンビーズによりプルダウンした。プルダウンされたビオチン化タンパク質中のAをウエスタンブロットにより検出し、膜タンパク質Aの細胞膜上の存在比を測定する方法を確立した。この解析を30種の癌細胞株について行った。また、タンパク質Dの発現も、これらの癌細胞株で検討した。

膜タンパク質Aの発現を抑制するためのshRNAを発現するレンチウィルスを作製した。膜タンパク質Aが細胞膜に高発現あるいは低発現している細胞株それぞれ6種に、作製したレンチウィルスを感染させ、shRNAを発現する細胞を選択した。膜タンパク質Aのノックダウンが各癌細胞の増殖に与える影響を検討した。

大腸癌あるいは肺癌由来の細胞株について、タンパク質Xのチロシンリン酸化レベルをウェスタンブロットで解析した。また、その遺伝子XをノックダウンするためにshRNA発現用レンチウイルスを作製した。遺伝子Xのノックダウンが各癌細胞株の足場非依存性増殖に与える影響を検討した。

被験物質が筋肉の発達・成長に及ぼす効果を検討するために、C2C12細胞の分化におけるミトコンドリア量の変化に与える影響を検討した。

ある疾患の原因として、肺や肝臓における細胞死が考えられている。この細胞死の誘導に関わる遺伝子Xの発現を抑制する薬の開発を目的とした。①HEK293細胞を用い、qPCRおよびウエスタンブロットにより、siRNAやアンチセンスオリゴの配列を比較選択した。②肺や肝臓由来の細胞株や初代培養を用い、遺伝子Xの発現上昇が見られる細胞死誘導系を確立した。③②の系を用いて、①で選択したsiRNAやアンチセンスオリゴが、細胞死誘導に関連する機能を抑制できるか検討した。

化合物がヒト酵素の翻訳後修飾に与える影響を検討するために、FLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製後、SDS-PAGEにより分離し、目的タンパク質のバンドを切り出し提出した。

食品原材料から抽出した分離画分5種が血管機能改善効果を示す可能性があるか検討するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞のNO産生に与える影響を、Griess試薬を用いて測定した。

提供いただいた開発中の細胞培養関連製品を用いて細胞を培養し、細胞増殖をWST assayで測定し、細胞毒性を評価した。

牛乳を用いて果実由来成分のタンパク質凝集作用の濃度依存性を評価した。合わせて、牛乳添加が該当成分の生理活性に与える影響を評価した。

受容体をアミンカップリングによってセンサーチップ表面に固相化後、各種リガンドとの相互作用を解析し、会合速度定数ka、解離速度定数kdを算出した。

委託者の開発品であるポリマーとタンパク質を複合化させ、複合化率及び複合化条件下でのタンパク質の安定性を分析した。

293系細胞にFab抗体重鎖および軽鎖発現ベクターを構築後、細胞へ一過性導入し、培養上清に分泌された組換えFab抗体の発現を検討した。発現した組み換えFab抗体はアフィニティクロマトグラフィーにより精製精製した。

コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いてリポソーム存在下でGPCRを合成した。リポソームに埋め込まれたGPCRを遠心により粗精製した後、界面活性剤によりGPCRを可溶化した。委託者の立会いのもとで試験を行うことで技術移管を実施した。

緑藻に含まれる特定の糖脂質を精製した。有機溶媒による抽出後、クロロフィル等の夾雑物を数工程のクロマトグラフィー処理により粗精製した後、逆相HPLCカラムで特定の脂質鎖を有する糖脂質１成分を純度95％以上で精製した。

特定の細胞に分化した場合に培養液中にマーカータンパク質を分泌するヒト間葉系幹細胞 (MSC) の調製を行った。細胞種特異的な活性を持つプロモーターと分泌型アルカリ性フォスファターゼのユニットを持つレンチウイルスを調製した。それをMSCへと感染させた後、薬剤選択により、ウイルス感染細胞を単離した。

目的タンパク質の分子結合ドメインとそのアミノ酸変異体300種類をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて調製した。Hisタグと蛍光タンパク質を付加して合成した組換えタンパク質をニッケルアフィニティークロマトグラフィにより精製し、標的分子との結合機能を評価した。

ヒトiPSCニューロンに被験物質及び陽性/陰性対照化合物を作用させ、得られたデータを元に人工知能ＡＩで解析することで、中枢毒性や神経機能のフェノタイプを評価

ヒトiPSCニューロンに被験物質及び陽性/陰性対照化合物を作用させて得られたデータを人工知能ＡＩで解析し、中枢毒性のプロファイルを評価した。また、既に取得している動物試験結果との相関性を検証した。

8種類の細胞培養基材をN=3で用意し、基材存在下で線維芽細胞を24-well plateを用いて1日~2週間培養した。培養後、MTTアッセイを行い、基材に細胞が接着しているかどうかを評価した。

C末端Hisタグ融合蛍光タンパク質、およびそのタンパク質のN末端にあるタンパク質のドメインを融合させたタンパク質それぞれについてコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系によりタンパク質合成を行った。合成タンパク質はNi-NTAアフィニティー精製を行った後、試験委託者指定の濃度に濃縮した。数mgの目的タンパク質を調製し、試験委託者に提出した。

齧歯類大脳皮質細胞やヒトiPSCニューロンを使用し、イオンチャネル・神経関連受容体・GPCRに作用する陽性対照化合物のデータと比較した。人工知能ＡＩにて解析することで作用点や神経機能作用を評価した。

提供いただいた4種類の凍結細胞サンプルについて、3種類の間葉系幹細胞マーカー (CD29、CD73、CD90) の発現をフローサイトメーターにより解析した。陽性対照として、テクノプロでそれらの発現を確認していたヒト間葉系幹細胞を使用した。4種類全ての検体において、CD29陽性/CD73陽性/CD90陽性の細胞を高い割合で含有することを明らかにした。

ヒトiPS細胞由来神経細胞（iPSCニューロン）に被験物質及び対照化合物を作用させて得られた神経活動データを、多変量解析及び人工知能AIで解析し、中枢神経毒性のプロファイルを評価した。まず、MEA (Microelectrode Array) プレート上でiPSCニューロンを培養し、ネットワークバーストの細胞外電位を測定した。更に、測定データから算出された電気学的パラメータを用いた多変量解析により、被験物質がパラメータに与える影響を検討し、被験物質のけいれん誘発ポテンシャル評価及び作用機序の推定を行った。人工知能AI解析では、対照化合物の神経活動ラスタープロットから画像認識により特徴量を特定しパターン認識を行い、アルゴリズムを積層して学習AIを作製した。学習AIに被験物質データを適応させて、毒性予測及び作用機序予測を実施した。

疾患原因遺伝子に変異を有するヒトiPSCニューロンを用いて、被験物質の薬効評価系を構築した。細胞を培養して原因遺伝子、神経マーカー、それらの遺伝子等の発現を経時的に解析した。更に神経ネットワークにおける活動電位の変化を多変量解析により検討し、試験系を最適化した。

前試験においてヒトiPSCニューロン疾患モデルのin vitro評価系を構築した後、本試験として、神経ネットワークにおける活動電位の神経機能を指標にして、被験物質の薬効を評価した。疾患iPSCニューロンモデル、及び健常なニューロンの神経機能を比較し、被験物質が疾患の状態を健常状態へ改善する効果を多変量解析及び人工知能AIを用いて評価した。

遺伝子編集によりターゲット遺伝子の発現が減少している神経疾患モデルのiPSCニューロン（変異株）を用いてMicroelectrode Array計測、及び電気生理学的パラメーターを基にした多変量解析により神経活動を確認し、遺伝子発現や神経マーカー発現の検討も含め、変異株の特徴を検証した。次に変異株を用いて被験物質（核酸化合物）の薬効として、ターゲット遺伝子の発現を正常化する作用、及びシナプス機能の改善作用を評価した。

目的タンパク質を発現させた哺乳類細胞ペレットから超遠心により粗膜画分を調製した。粗膜画分から界面活性剤を用いて目的膜タンパク質の可溶化を行い、超遠心により可溶性画分を調製した。可溶性画分にアフィニティ精製を行い、最終的に200mLスケールの発現細胞ペレットから0.2mg分の細胞膜タンパク質を調製した。

数種類の膜タンパク質をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により合成した。合成は透析重層法 (2.5 mL)で各1反応ずつ実施した。
合成膜タンパク質はプロテオリポソーム調製を行った後、界面活性剤を用いて可溶化させた。可溶化後の遠心上清を用いてタグアフィニティー精製を行い、ゲル濾過クロマトグラフィーで所定のバッファーに置換した。

試験委託者提供のヒトiPS細胞に対して、EF-１αプロモーター制御下で蛍光タンパク質を発現する発現カセットをAAVS1 safe harborへ導入した。iPS細胞の薬剤選択濃度の検討、発現ベクターの構築、iPS細胞への遺伝子導入方法の検討（lipofection、electroporation）、iPS細胞への目的遺伝子の導入、蛍光観察およびPCRによる目的遺伝子座への発現カセットの導入確認を実施した。

特定のプロモーター配列に蛍光タンパク質を接続した発現カセット (プラスミド) を作成し、その後、HEK293細胞でプロモーター活性（蛍光タンパク質の発現）を確認した。その発現カセットをヒトiPS細胞中のAAVSAAVS1 safe harborへ導入し、薬剤選択後、PCRにより目的領域への発現カセットの導入を確認した。

ヒトiPS細胞から分化誘導した腸管上皮細胞をトランズウェルインサート上で培養し、バリア能を経上皮電気抵抗（TEER）値測定により評価し試験に用いた。バリア能を有している状態の細胞からタンパク質を抽出し、ウエスタンブロットにより腸管膜透過に関わる遺伝子が発現していることを確認した。透過性試験は、検体をapical面もしくはbasolateral面にそれぞれ2濃度ずつN=3で添加した。検体添加24時間後および48時間後のapical側およびbasolateral側の培地を回収し、ELISA法にて培地中の検体濃度を測定した。測定データからPapp値を算出し、報告書にまとめて提出した。

委託者提供の資料を基に、指定化合物の合成を行った。
原料1及び原料2は特許を参考に、5工程及び3工程で合成した。また、原料1と原料2を塩基性条件下で反応させて、指定化合物を合成した。

指定の低分子化合物の合成とエステル化を行った。

参考文献より、アミノアルコールの合成ルートの探索及び合成 (50g) を行った。

FTE契約にて、アゾール化合物の合成を行った。
スケールアップを念頭に置いた合成方法の検討も行った。

委託者提供の資料を基にRAFT重合による共重合体の合成を実施した。そして、スケールアップ条件を検討した。

7-ACA誘導体を3化合物合成した。合成方法の探索及び検討も実施した。

製品の設計目標に見合う複数の要求特性を満たす材料の有無について、有機材料、無機材料を問わず広く調査した。既存製品や開発品についてはメーカより情報収集を行うとともに、技術文献（論文、国内・海外出願特許）より技術的に可能であるかの調査を行った。調査当時に入手できる材料（見込みを含む）では全ての特性を満足することは叶わなかったものの、有望ないくつかの研究開発情報があったため、その研究機関と技術情報を報告した。

高分子材料から極微量の溶出物があり規格NG。その溶出物を特定したいものの、委託者は高分子材料についての知見が少ないため苦労されていた。そこで、高分子材料の材料配合や製造プロセスに関する豊富な知見と、技術情報調査の結果から、溶出物の候補をリストアップし、効果的な分析手法を提案した。外部分析機関に分析の協力を仰ぎ溶出物を特定し、その結果より溶出物の混入ルートを特定できた。

ある成形品の３Dプリンティングに関する海外の研究開発動向について、公開情報、論文、特許などを調査し、進捗状況、課題、材料やプロセスの特徴について報告書にまとめた。

調査対象となる素材に関する研究を実施している研究機関がこれまでに獲得した公的研究資金を調査することで、研究動向について検討した。

競合他社の登録特許に対して異議申立対応を行うための情報収集を目的として、先行文献や先願特許を調査した。

依頼者の製品である蛍光物質の診断薬への応用を目的として、既存診断薬との直接・間接的性能比較による自社製蛍光物質の優位性の担保、抗体分子への化学修飾法について検討した。

固定化触媒を用いた精密フロー合成おいて、触媒の種類、反応式、反応スケール、装置等に関する情報を論文から調査した。

酸化金属表面に有機化合物を固定するための方法について文献を調査した。

医薬品成分の安定化剤の種類、処方、保存安定性試験データを特許実施例から収集した。

工業用アフィニティークロマトグラフィーの担体の種類およびリガンドの固定化方法について文献調査を行った。

乳酸菌の新規培養法に関する特許出願に際し、出願技術の新規性・進歩性を証明するために、既存の乳酸菌培養法に関する文献・特許調査を行った。

委託者のシーズ技術であるパッキン技術の異分野へ転用検討の一環として、異分野におけるパッキン技術の適用事例や開発動向に関する情報を収集するために、文献・特許を調査した。

既に確立された酵素の化学発光反応系を用い、提供された化合物について、60種類の酵素を個別に1536-well plate上で反応させ、その化学発光をプレートリーダーにて測定した。測定データ (プレート 16枚分) を提出した。

哺乳類細胞において、指定の guide RNA 配列および Cas9 タンパク質を発現させる All-in-one 型プラスミドベクターを3種類、設計・作製し、提出した。

提供いただいた436個の尿検体について、9種類の ELISA キットを用いて、標的タンパク質の濃度を定量した。

陽性対照となる細胞を用いたウエスタンブロットを行い、標的遺伝子産物に対する複数種類の抗体から、機能的なものを選別した。siRNAを導入した細胞において、選択した抗体を用いたウエスタンブロットを行い、siRNAによる遺伝子発現抑制を評価した。

タンパク質A-核酸Bの相互作用をHTRFにより測定するアッセイ系を用いて、提供された40万種類の化合物 (1536-well plateに分注済み) の相互作用阻害能を検討するため、それらの存在下でHTRFの測定を行った。

提供いただいた被験物質に対する線虫の走化性並びに活動性を撮影した動画を解析し、評価した。

哺乳類細胞において、目的遺伝子AおよびBを同時に共発現させるプラスミドベクターを構築した。そして、トランスフェクション用のプラスミド調製を行い提出した。

標的遺伝子に対するguideRNAとCas9を発現するレンチウイルスベクターを調製した。そして、提供いただいた細胞に感染させ、感染が成立した細胞を薬剤により選択した。

標的遺伝子に対するguideRNAを3種類設計し、それぞれの切断効率を培養細胞を用いて評価し、最も切断効率の高いguide RNAを選択した。その guide RNAとCas9を共発現するプラスミドベクターを構築した。

4種類の導入試薬を用いて、各種条件で細胞株に核酸を導入した。導入24、48時間後に細胞からRNAを抽出し、標的遺伝子Aおよび内部標準遺伝子Bの発現量をリアルタイムPCR (qPCR) で定量的に評価した。

ヒト線維芽細胞からRNAを抽出し、6種類の標的遺伝子の発現量をリアルタイムPCR (qPCR) で評価した。

委託者より提供された陽性対照となる細胞からタンパク質抽出液を調製した。そして、抗体Aおよび抗体B並びにβ-アクチンに対する抗体を用いたウエスタンブロットを行い、標的タンパク質が検出されるか否かを確認した。

標的遺伝子に対するリアルタイムPCR (SYBR Green I) 用のプライマーを設計した。リアルタイムPCR (qPCR) により、提供いただいたRNA中の標的遺伝子の発現量をβ-アクチンに対する相対発現量として定量的に評価した。

提供いただいた3種類のプラスミドについて、それぞれトランスフェクショングレードにて2mg以上調製し、提出した。

CHO系細胞を用いて3種類の組換え抗体の発現条件の検討を行った。そして、細胞培養上清中の組換え抗体の状態を還元/非還元のSDS-PAGE により解析した。

植物AのマイクロRNAをPCR増幅後にプラスミドへ挿入し、miRNA発現プラスミドを構築した。マイクロRNAの標的配列を合成後、ルシフェラーゼ発現プラスミドに挿入し、レポータープラスミドを調製した。

CHO系細胞にHis-tag標識されたタンパク質Aを一過性発現させ、培養上清からTALONレジンによりタンパク質Aをアフィニティー精製した。そして、タンパク質Aに対する抗体を用いたウエスタンブロット解析を行い、精製物が抗体によって認識されることを確認した。

哺乳類細胞において、N末端側にFLAG配列を付加した目的遺伝子を発現するプラスミドベクターを構築した。その後、プラスミドをMini-prepレベルで調製した。

目的遺伝子を哺乳類細胞において発現させるプラスミドベクターを構築した。それをヒト大腸がん細胞株へリポフェクションにより導入し、薬剤耐性となった細胞をクローン化した。クローン細胞において、目的遺伝子の発現をリアルタイムPCR (qPCR) により測定し、発現量の高かった5クローンを提出した。

提供いただいた3種類の培養プレート上で哺乳類細胞を培養した。2種類の増殖阻害剤をそれぞれ、段階希釈して添加し、その後の細胞増殖をMTSアッセイで評価した。

2種類の浮遊系細胞について、エレクトロポーレーションによる遺伝子導入の検討、ならびに、選択薬剤の至適濃度の検討を行った。そして、最適化された条件でプラスミドベクターを導入後、薬剤選択を行い、薬剤耐性を示し、プラスミドが安定導入された細胞を提出した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で過酸化水素を添加し、産生されるIL-1αの量をELISAにて評価した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、一酸化窒素 (NO) の量をQuantiChrom Nitric Oxide Assay Kit を用いて評価した。

正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、IL-1αの産生量をELISAにて評価した。

200検体に含まれるタンパク質Aの濃度をELISAを用いて測定した。

タンパク質A-タンパク質Bの結合をHTRFにより測定するアッセイ系を用いて、7種類の化合物の結合活性に与える影響を評価した。

5種類の被験物質をヒト乳がん細胞株に添加し、WSTアッセイを行い、被験物質の細胞増殖に与える影響を評価した。また、マイクロアレイによる発現解析を行うため、被験物質を添加した細胞からRNAを抽出、精製した。

提供された細胞に3種類のプラスミドをそれぞれ、リポフェクションにより導入した。その後、細胞を回収し、ホルマリン固定を行い、提出した。

提供いただいた特殊な細胞に12種類のレンチウイルベクターをそれぞれ感染させ、薬剤選択を行い、薬剤耐性となった感染細胞の凍結ストックを調製し、提出した。

PCRにより調製した2本鎖DNAと提供いただいた物質を指定の条件で反応させ、その反応産物をPAGEにより解析した。

提供いただいた核酸類縁体を各種濃度の核酸分解酵素で処理し、その後、HPLCにより分解の程度を解析した。

提供いただいた細胞を拡大培養し、凍結ストック (>1x10^6 cells/vial x 14本) を調製した。

4種類の菌類を培養し、加熱により不活性化後、指定の菌濃度に調製し、提出した。

化粧品素材を表皮角化細胞に添加した際の細胞生存率を調べ、細胞傷害性を評価した。

培養細胞に被験物質を添加し、分泌された副腎皮質ホルモンをELISAにて測定した。

被験物質が筋肉の発達・成長に及ぼす効果を検討するために、C2C12細胞の分化におけるエネルギー産生関連遺伝子の発現量を調べた。

アルコール代謝の関連酵素を用いて酵素活性を指標にした被験物質のスクリーニングを実施した。

食欲抑制に関わる因子の作用機序を調査しレビューを作成した。

血液から細胞を分離後、被験物質を添加して一定期間培養し、ELISAにてサイトカインを測定した。

培養細胞に植物エキスを添加し、ストレス関連ホルモン受容体のmRNA発現量をリアルタイムPCR (qPCR) にて評価した。

cDNA 230種についてSYBR Green I を用いたインターカレーション法にて計3,720検体のリアルタイムPCR (qPCR) を実施した。

変形性関節症の関連酵素に対する阻害剤の評価 (IC50の算出) を行った。

SDS-PAGEによる補体活性評価系を構築し、活性化阻害剤の評価 (IC50の算出) を行った。

培養細胞にて脂肪蓄積を誘導し、蓄積に対する阻害剤の評価 (IC50の算出) を行った。

マウスに被験物質を経口投与した後、肝臓中のアルコール代謝関連酵素の活性を測定した。

細胞培養上清中に含まれるサイトカインをメンブレン抗体アレイ及びELISAにて評価した。

血漿中の血圧降下関連因子をELISAにて測定した。

培養細胞を用い、siRNAによる標的遺伝子のノックダウンを行い、関連遺伝子のmRNA量をqPCR (TaqMan法) にて評価した。

植物エキスの抗酸化能を評価し (Trolox等価活性)、抗菌作用 (IC50) を評価した。

細胞6種に対し標的遺伝子をアンチセンスオリゴによりノックダウンし、ノックダウンによる影響を細胞生存率、アポトーシス及び関連遺伝子の発現量 (qPCRによる測定) を調べることで評価した。

癌細胞株にレポータープラスミドを導入しプロモーターアッセイ系を構築した後、約300種の被験物質について、プロモーター活性への影響を評価した。

開発素材の触り心地についてモニターを募集し、触感に関するワードにて評価軸を設定し官能評価を実施した。

血液から血清を調製しELISAにてステロイドホルモンを測定した。

関節炎に関連して、軟骨細胞におけるII型コラーゲン及び滑膜細胞における炎症性サイトカインをELISAにて定量した。

ルシフェラーゼを発現するレポーター細胞を用いて、開発素材の細胞への効果を定量的に評価した。

癌細胞株に化合物を作用させ、通常培養条件下と低酸素培養条件下で細胞増殖を比較した。また、培養上清中の低分子化合物をHPLCにより測定した。

分泌タンパク質AのStrepタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、培養上清からStrepTactinアフィニティー精製を行った。

ウイルスがコードする酵素のFLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製を行った。精製された酵素の活性を測定し、活性が保持された高純度の酵素が精製されたことを示した。

ヒトの酵素のFLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製を行った。

ご提供頂いた細胞溶解液5種を用いて、FLAGタグ融合タンパク質のアフィニティー精製を行った。

FLAGタグあるいはGST融合タンパク質6種について、哺乳類浮遊細胞1 Lスケールで発現させ、アフィニティー精製を行った。

ヒト酵素のHisタグ付きタンパク質を哺乳類細胞で発現させるプラスミドベクターを構築した。構築したプラスミドを哺乳類浮遊細胞に導入し、目的タンパク質の産生条件を検討した。さらに、目的タンパク質のアフィニティー精製条件を検討した。

ヒト酵素のHisタグ付きタンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、2 L培養分の細胞を用いて、大量精製を行った。

試験委託者よりご提供いただいたハイブリドーマの拡大培養・凍結ストックの作製を行った。また、培養上清150 mLを用いて、Protein Gセファロースにより、抗体を精製した。

試験委託者よりご提供いただいた、20種のハイブリドーマ培養上清１Lずつから、Protein AセファロースあるいはProtein Gセファロースを用いて、抗体の精製・透析・濃縮を行い、納品した。

増殖因子刺激によるERKリン酸化を検出するアッセイ系を確立するために、AlphaLISAキットを用いて増殖因子量依存的リン酸化の検討を行った。

増殖因子刺激による受容体チロシンキナーゼの二量体化を検出するアッセイ系を確立するために、化学発光検出キットを用いて増殖因子量依存性を検討した。

増殖因子による遺伝子発現誘導を検出するアッセイ系を確立するために、レポーターアッセイにより増殖因子量依存性を検討した。

増殖因子刺激によるヒト表皮角化細胞株のヒアルロン酸産生アッセイ系を確立するために、ELISAにより増殖因子量依存性を検討した。

増殖因子刺激によるヒト表皮角化細胞株の細胞増殖アッセイ系を確立するために、WST-8により増殖因子量依存性を検討した。

被験物質が毛乳頭細胞を活性化する効果を持つかを検討するために、ヒト頭髪由来の毛乳頭細胞で細胞増殖や増殖因子の産生を測定した。

被験物質が血管機能改善効果を示す可能性があるか検討するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞のNO産生やサイトカイン産生に与える影響を検討した。

抗癌剤の候補化合物が、癌細胞株の翻訳開始因子の複合体形成に影響を与えるかを、プルダウンアッセイにより検討した。

抗癌剤の候補化合物が、癌細胞株の増殖に与える影響を検討した。

ヒト線維芽細胞の初代培養を用い、各種刺激によるAkt、Stat3、Stat6のリン酸化を、各リン酸化タンパク質特異的抗体を用いたウエスタンブロッティングにより検出した。

ヒト線維芽細胞の初代培養を用い、IL-4刺激によるターゲットタンパク質のリン酸化を、各リン酸化タンパク質特異的抗体を用いたウエスタンブロッティングにより検出した。

癌細胞株を、10枚のT-225フラスコに拡大培養し、無血清培地に置換後2日間培養し、培養上清を回収・清澄化し、提出した。

ご提供頂いた哺乳類細胞をCO2濃度8%下で振とう培養し、凍結細胞ストックの作製、および1 Lの培養上清の調製を行った。

酵母の培養における、各種培地や環境の条件を最適化するため、20条件に付いて、細胞密度、酸素濃度、pH、分泌ペプチドの測定を経時的に10時間ずつ行った。

抗癌剤の候補物質が、癌細胞株のミトコンドリア機能に与える影響を検討するために、ミトコンドリア構成タンパク質3種の発現をスウエスタンブロットにより検出した。

ご提供頂いた細胞溶解液のタンパク質濃度を測定し、一定量のタンパク質溶液について6種類の抗体でウエスタンブロットを実施し、各タンパク質の産生量を比較検討した。

ご提供ただいた組織サンプルを可溶化し、タンパク質濃度を測定した。一定量のタンパク質溶液について、抗JNK抗体と抗リン酸化抗体によるウエスタンブロッティングを行い、JNKのリン酸化レベルを比較した。

各種核酸保存試薬、核酸保存製品、分子生物学研究用酵素の性能を市販品と比較評価した。

PCR装置の新製品の評価を行うために、連続ランによる安定性や気密性の確認を行った。

分子生物学研究用製品のヌクレアーゼフリーを検証するために、DNaseおよびRNaseの活性を測定した。

被験物質が光刺激依存的な神経活動に与える影響を検討するために、マウスから生体切片を調製し、微小電極アレイ法のより神経細胞の活動を測定した。

核酸医薬品候補の血清中安定性、in vitro培養系でのノックダウン(KD)効率、in vivoサンプルでのKD効率をreal-time PCR (qPCR) により評価した。加えて、安定発現細胞株の作製、in vitro translationなども行った。

3種類のHLAタンパク質を発現する発現ベクターを構築し、ヒト癌細胞株にトランスフェクションして安定発現細胞株を樹立した。目的タンパク質の発現を、共焦点レーザー顕微鏡とフローサイトメーターにより確認し、シングルクローン化した。

マウスの大腿筋にエレクトロポレーション法によりDNAワクチンを接種した。

新たなPCR装置開発のため、PCR反応前後で溶液物性が変化する反応条件を検討した。

天然物からの抽出物をハムスター皮脂腺細胞に添加し、皮脂合成能および細胞増殖能を評価した。

麹菌を培養し、培養液を熱処理して菌を死滅させた。調製した死菌サンプルを提出した。

菌培養液に含まれるオリゴ糖の精製条件を検討した。最終的に100 gスケールでの精製から目的物を数十g得た。

幾つかの変異を含むタンパク質に既存医薬品を添加し、限外ろ過を利用して、未結合医薬品を回収し、HPLCで定量した。

果実種子の種皮と胚乳部分を分離し、抽出後、LC-MSを用いて、生理活性成分を定量した。

果実種子由来の生理活性化合物の抽出及び精製条件を検討し、化学分析に必要な数十mgを精製した。

沈殿法による漢方薬に含まれる低分子化合物の分離法を検討した。

特殊加工されたフィルム表面のみに菌液を滞留させ、一昼夜後の菌体濃度を測定して殺菌能力を評価した。

植物由来のトリグリセリドの精製のための効率的なクロロフィル除去方法を検討し、効果的な方法を発見した。

食品添加物規格に準じた植物由来トリグリセリドの精製法を確立した。

植物由来のトリグリセリドをHPLC純度95％以上で精製した。

ウイルスデバイスを創成するための検出方法に関する調査を行った。

ヒト及び他哺乳類の酵素Aについて複数の基質を用いた場合の阻害活性評価系を構築した。構築した評価系を用いて、9種類の化合物について阻害能を評価した。

タンパク質へのコンジュゲーションを目的として既知薬剤にマレイミド基を導入した化合物を合成した。

オカラ培地の抽出及び低分子化合物の精製を行い、目的化合物を数十mg得た。

ある食品に含まれる特定のポリフェノールを数種類、数十mg精製し、提出した。

合成した脂質結合型カテキン類を用いて、ある食品抽出液中の該当化合物の定性及び定量試験を実施した。

1L小型ジャーファーメンターを用いて、数種類の培養液での培養、発酵状況を検討した。培養、発酵状況は、HPLC等を利用して栄養素、発酵産物を定量データから評価した。

分子量の異なるタンパク質混合溶液を用いて、提供いただいた開発中の中空糸膜のろ過性能評価を実施した。一定時間間隔でろ液を回収し、ろ液量からろ加速度を評価した。またろ液をSDS-PAGEで分析し、限外ろ過能を評価した。

化学素材へのタンパク質のコンジュゲーションの評価方法を確立した後、幾つかのコンジュゲーション条件を検討した。

加熱食品中に含まれる生理活性物質の単離及び化学構造決定に関するコンサルティングを行った。推定化学構造から、薬剤としての構造最適化や合成に関しても実験業務も含めて実施した。

市販漢方エキス製剤について、有機溶剤を用いての抽出作業を実施した。

植物に含まれる特定の配糖化色素を種々のクロマトグラフィーを用いて精製し、純度97%以上の該当色素を数百mg、提出した。

抗体及び抗体断片のそれぞれついて、SYPRO Orangeを用いたThermal Shift Assayを行い、変性温度Tmを決定した。

大腸菌発現系にて不溶性発現した酵素をリフォールディングし、活性を持つ酵素を調製した。

精製タンパク質を様々なpH、塩濃度及び添加剤存在下、複数の温度条件下で4週間保存し、タンパク質の性状の変化（分解、多量体形成）をSDS-PAGEによって解析した。

委託者の開発品である膜モジュールを用いてタンパク質を濃縮し、濃縮効率及び回収率、濃縮前後におけるタンパク質の安定性を解析した。

ブタ臓器を開始材料とし、硫安沈殿、熱処理、イオン交換及びゲル濾過クロマトグラフィーの組み合わせによって高純度の目的酵素を精製した。

ブタ臓器を開始材料とし、加熱処理、イオン交換クロマトグラフィーの後、自作カラムによって最終精製し、高純度の目的酵素を精製した。

大腸菌発現系にてアレルゲンタンパク質をMBP融合タンパク質として発現し、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー及びゲル濾過クロマトグラフィーによって精製した。

大腸菌発現系にて天然変性タンパク質をGST融合タンパク質として発現し、アフィニティークロマトグラフィー及びゲル濾過クロマトグラフィーによって精製した。

大腸菌発現系にてアルパカ由来VHH抗体を発現し、アフィニティークロマトグラフィーによって精製した。精製後のタンパク質の性状及び多量体化をゲル濾過クロマトグラフィー及びThermal Shift Assayによって分析した。

組換えタンパク質の発現精製した後、そのタンパク質に対する低分子化合物の結合を、表面プラズモン共鳴 (SPR) 法によって解析した。

ヒト血清から抗体カラムを用いて目的タンパク質を精製した。

タンパク質に対するポリマーのコンジュゲーションプロセスを実験室レベルで開発した。

細菌の培養上清に分泌される内在性の新規抗菌性ペプチドをカラムワークにより単離・精製した。

果肉の凍結乾燥粉末からタンパク質を抽出し、抽出液に含まれる特定の内在性タンパク質をカラムワークにより単離・精製した。

大腸菌発現系を用いて標的タンパク質を分泌タンパク質として発現させた。最適発現条件の検討後、ニッケルアフィニティクロマトグラフィーによりペリプラズム画分から標的タンパク質を精製した。

哺乳類培養細胞から核を単離し、核抽出液に含まれる特定の核タンパク質を抗体アフィニティクロマトグラフィーにより単離・精製した。

293系細胞に様々な種類の組換え抗体発現ベクターを構築後、細胞へ一過性導入し、培養上清に分泌された組換え抗体の発現条件の検討を行った。発現が確認された組換え抗体についてアフィニティクロマトグラフィーによる精製を実施した。

Hisタグを付加した糖結合タンパク質を大腸菌発現系により発現させた。最適発現条件の検討後、ニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより計 20 g のタンパク質を精製した。

目的タンパク質を昆虫細胞でバキュロウイルスとして発現させるベクタープラスミドを構築した。それを元に昆虫細胞発現系およびコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて組換え酵素の発現および大スケール精製を行った。また、精製した組換え酵素と基質を用いた酵素反応試験を実施した。

哺乳類細胞発現系、昆虫細胞発現系およびコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて膜タンパク質を発現させた。膜画分を抽出し、ニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより膜タンパク質を粗精製した。

昆虫細胞発現系およびコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて2種類の組換えタンパク質を発現させた。ニッケルアフィニティクロマトグラフィーによる精製後、ビオチン標識を行った。

昆虫細胞発現系およびコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて複数のタグを付加した2種類の組換えタンパク質を調製した。両者のタンパク質間相互作用を、AlphaScreenにより検出した。

アミノ酸点突然変異を導入した300種類のタンパク質をデザインし、変異体遺伝子ライブラリーを作製した。コムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて96ウェルプレート上にタンパク質アレイを構築した。合成したタンパク質はニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより精製した後、活性測定試験に用いた。

委託者が開発した検体測定用試作機を搬入・設置し、長期間継続的に検体を測定することで試作機の評価データを取得した。

検体から特定の細胞を単離し、得られた細胞についてフローサイトメトリーを用いて解析した。

標的酵素遺伝子を発現させた培養細胞からニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより酵素タンパク質を精製した。精製した酵素に対してプロテアーゼを処理することで酵素を活性化した後、その酵素活性を測定した。

10種類 の検体を対象として41種類の抗体を用いたウエスタンブロットを実施した。抗原タンパク質の検出を指標として抗体の評価を行った。

RAW264.7細胞から破骨細胞誘導する系を用い、被験物質の破骨細胞分化抑制作用を評価した。

固相合成法で40残基ポリグルタミン酸ペプチドを合成した。HPLC純度で98%以上のペプチドを5 mg、納品した。

スクリーニングへの使用目的で、Digoxigenin及びビオチンを結合させたペプチドを合成した。純度95%以上のペプチド、5 mgを納品した。

哺乳類細胞において、1) 目的遺伝子Aの野生型、2) 目的遺伝子Aにアミノ酸変異を導入したものを、それぞれ発現させるプラスミドベクターを構築した。そして、トランスフェクション用のプラスミド調製を行い提出した。

BioProfileFLEX2を用いた細胞培養液の分析を行った。500 μL程度の培養液中のグルコース、乳酸、グルタミン、グルタミン酸、NH4＋、Na+、K+、Ca++の代謝4項目、電解質4項目を測定した。サンプル受領から5営業日以内に測定結果を提出した。

一般的にガスクロマトグラフィーで分析される水道水中のカビ臭原因成分について、LC-MSでの定量条件の検討を行った。

JIS Z 2801:2010（ISO 22196:2007）を準拠して、非病原性大腸菌を用いて表面加工フィルムの抗菌活性を評価した。

比色法を用いて試験用品中のエンドトキシンを定量した

ご提供いただいた微生物の胞子懸濁液について、特定タンパク質の分解活性および各種プロテアーゼ阻害剤による活性阻害を解析した。また、キチンに対する分解活性を測定した。

タンパク質製品の品質管理で使用している分析カラムの互換性を検証した。
クロマトグラム及び分画のタンパク質濃度の再現性を確認した。

3種類の被験物質が、正常ヒト表皮角化細胞の1種類の遺伝子発現に与える影響をqRT-PCRにて検討した（N=2）。

正常ヒト真皮線維芽細胞のおける、2種類の遺伝子発現を、qRT-PCRにより測定した (N=2)。3種類の被験物質の影響、アンチセンスオリゴを用いたノックダウン効果などを評価した。

ご提供いただいた5種類の癌細胞株、それぞれについて拡大培養を行い、その後、RNAの抽出、精製を行った。併せて、培養上清、細胞ペレットを調製し、提出した。

14化合物が、オレイン酸存在下でのHepG2細胞のトリグリセリド産生に与える影響を、濃度1点、N=2で、市販のキットを用いて検討した。

細胞外プロテアーゼの活性に与える影響を、27化合物について、1濃度、N=2で、市販のキットを用いて検討した。

酵母発酵液から多糖類を簡易除去後、各種カラムクロマトグラフィー法を用いて、二糖から四糖までの低分子オリゴ糖を精製した。

リコンビナント成長因子の製品品質を検査するための予備試験を行った。品質検査は、リコンビナント成長因子の受容体型チロシンキナーゼのリン酸化を検出するキットを使用した。コントロール標品を含む11サンプルについて、10点の濃度(N=4)で活性を測定し、EC50を算出することにより評価した。

目的のウイルス由来タンパク質を哺乳類細胞において発現させるプラスミドベクターを2種類設計し、それらを遺伝子合成並びに市販の基本ベクタープラスミドを用いて構築した。

複数のクローンを含むと考えられる培養細胞のゲノム中の標的領域のSNP頻度を次世代シーケンサーを用いて解析した。

動物用検査装置の再利用を想定し、装置サンプルへのタンパク質残留量評価試験の確立および評価を行った。

サイズ排除クロマトグラフィー及びイオン交換クロマトグラフィーを用いたDNA-酵素複合体の精製条件を検討した。

ヒト由来細胞株を用い、約300種類の被験物質添加による目的遺伝子の発現量亢進を定量的PCR (qPCR) により評価した。

96-wellプレートに播種した表皮角化細胞株を用い、被験物質添加による細胞遊走を顕微鏡イメージング後、画像解析による定量的評価を行った。

表皮角化細胞株を用い、被験物質によるERKリン酸化についてELISAにより評価した。

表皮角化細胞株を用い、被験物質によるEGFRリン酸化についてELISAにより評価した。

お客様よりいただいた目的遺伝子名から、情報収集を行い、哺乳類細胞において目的遺伝子を強制発現させるレンチウイルス発現用プラスミドを1種類構築した。そのプラスミドを用いて、1種類の遺伝子発現用レンチウイルスを調製した。

免疫沈降に使用する抗体を選定するため、Western blottingにより６種類の抗体の反応性を検討した。その結果、良好な反応性を示し、適切と考えられた抗体を1種類を選定した。

遺伝子組換え大腸菌を40 Lスケールで培養し、集菌・超音波破砕の後、試験委託者よりご指定のプロトコールに従って封入体を調製した。

PCRプローブの検証、および、タイムコース試験による試験条件設定後、約30種の被験物質について、がん細胞株での目的遺伝子の発現量亢進を定量的PCR (qPCR) により評価した。

小スケール大腸菌培養による多数（96条件/回）の変異体発現を行うにあたっての培養/発現/活性測定系の構築・最適化を行った。

3種類のレンチウイルス発現用プラスミドベクターから3種類のレンチウイルスの調製を行った。調製したレンチウイルスのタイターをqPCRベースで測定し、それぞれ細胞に感染させ、薬剤選択し、目的タンパク質発現細胞株を作製した。

ショウジョウバエ成虫を用いて、被験物質存在下での単位時間当たりの活動量、および、被験物質への誘引行動などを記録、評価した。

プラスチック器具の核酸吸着性、タンパク質吸着性、PCR阻害物質の混入の有無について評価を行った。

新規IMAC担体の性能試験用にHis-tag付加タンパク質を大腸菌発現系にて調製した。3種類のタンパク質を、100 mgを目安に大量発現し、破砕した後、可溶性画分を調製して提出した。

GPCRを定常発現した細胞（384-well プレート）を用い、ForskolinおよびGiアゴニストの条件検討によるアッセイ系構築後、250種の被験物質についてGiアゴニスト活性を評価した。

哺乳類細胞での2遺伝子の同時発現を目的としたベクターを2種類構築した。基本プラスミドの薬剤耐性遺伝子をピューロマイシン耐性遺伝子に交換した。その後、2種類の目的遺伝子をそれぞれ別個のプロモーター下流に挿入したプラスミドを構築した。

提供いただいた細胞溶解液を元に、免疫沈降の条件検討を行った (抗体反応時の界面活性剤の種類、およびその濃度等、計6条件) 。

24-well plateに播種した細胞に試験委託者提供の2種類の被試験物質を濃度を4段階に振って添加後、細胞からRNA抽出・cDNA合成し、qPCRを実施し、遺伝子発現を測定した。1回の試験では96-well plateで2枚分のqPCRを実施した。

生分解性高分子をゲルろ過クロマトグラフィー（SEC）で分子量で分画した。
分析対象画分を酸加水分解した後、PTCアミノ酸分析法で構成アミノ酸を定性、定量した。

指定の分析条件で、市販抗体を逆相HPLCで測定し、保持時間の再現性を確認した。

pHが酸性になることにより蛍光強度が強くなる指示薬を使用して、被験物質を添加することで培養細胞の細胞内が酸性になるかどうかを検討した。

被験物質添加に伴ない、細胞内pHが変化するかを検討した。ヒト初代培養細胞に約20種類の被験物質をそれぞれ添加した。一定時間後に蛍光プローブの細胞内蛍光強度を測定し、pH変化を評価した。

歯肉繊維芽細胞における目的遺伝子の発現量をリアルタイムPCR (qPCR) で定量的に評価した。また、細胞培養上清中のコラーゲン量をELISAにより評価した。

提供いただいた10種類のDNAについて、1種類の制限酵素により消化後、1%アガロースゲル電気泳動後にナイロンメンブレンへと転写した。鋳型 DNA を元に PCR を行い、DIG 標識 DNA プローブを調製し、ナイロンメンブレン上のDNAとハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーションのシグナルは、アルカリ性フォスファターゼ標識抗DIG抗体により化学発光として検出した。

酸化ストレス応答として、ヒト培養細胞における Nrf2 遺伝子および Nrf2 標的遺伝子の発現量を、リアルタイムPCRにより測定した。予備検討において、陽性対照化合物を用いて、試験時間・濃度条件を決定したうえ、100種類以上 (n=2) の被験物質について、スクリーニングを実施した。

レポーター遺伝子を細胞に一過的に導入、発現させた上、そのレポーター遺伝子の発現を制御する化合物を384-well plateでスクリーニングする系の構築を目指した。本件では、その前段階として、96-well plateでの細胞播種数、レポーター遺伝子の発現測定時期の検討を行い、至適な播種細胞数、発現測定の時期を決定した。

レポーター遺伝子を細胞に一過的に導入、発現させた上、そのレポーター遺伝子の発現を制御する化合物を96-well plateで評価する系を用いて、化合物一種類について、多濃度にて測定を行い、用量反応曲線を作成した。

コーティングの異なる6種類の管状検体に対して、ペルオキシダーゼ標識抗体を用いたタンパク質吸着試験を実施した。1 cm長の検体に吸着したタンパク質量を定量し、コーティングの違いによるタンパク質吸着量への影響を評価した。

HTRFを用いて、タンパク質Aがホモ多量体を形成したときのシグナルを検出する系を構築した。また、ホモ多量体形成に影響を与える試薬を添加し、多量体形成状態の変化によるシグナル変化を構築系で観測した。

異なるタグを付与したタンパク質A (Hisタグ融合タンパク質AおよびHis, FLAG融合タンパク質A) を大腸菌発現系を用いて発現させた。IPTG濃度3点およびタンパク質発現誘導後の培養温度3点を検討し、タンパク質が最も可溶性画分に発現する条件でタンパク質発現を行った。Hisタグ融合タンパク質Aに関しては、可溶性画分のニッケルアフィニティ精製により高純度Hisタグ融合タンパク質Aを得た。His, FLAG融合タンパク質Aに関しては、可溶性画分のニッケルアフィニティ精製後、プロテアーゼによりHisタグを切断し、ニッケルアフィニティ精製およびイオン交換クロマトグラフィーにより不要成分を除去することで高純度FLAGタグ融合タンパク質Aを得た。それぞれの精製サンプルの複合体形成状態をゲルろ過クロマトグラフィーにより確認した。

マウス大脳皮質の初代培養細胞に対する被験物質の神経活動作用をMEA (Microelectrode Array) により測定した後、多変量解析及び人工知能AIを用いてデータ分析し、けいれん作用に関するプロファイルを明らかにした。まず、当該細胞をMEAプレートで培養して神経ネットワークを構築した。けいれん惹起物質で処理後、培養液に被験物質5種類及び対照化合物9種類を添加して細胞外活動電位のデータを取得した。電気生理学的パラメータを使った主成分解析法及び神経活動の特徴量から作製したAIを用いて、被験物質のプロファイリング及びけいれん惹起物質処理による被験物質の作用を評価した。

ロットが異なる同一のタンパク質について、Size Exclusion Chromatography解析、Thermal shift assay、SDS-PAGEの3種の手法を用いて性状解析を行い、ロット間差の要因について解析した。

酵素反応で生成した化合物の蛍光強度から酵素活性を評価した。まず、酵素反応に使用する酵素濃度の検討を行った。次に、酵素阻害活性は一般的にミカエリス定数付近の基質濃度において評価されるため、基質のミカエリス定数を求めた。最後に、本試験で決定した酵素濃度及び基質濃度の条件が阻害評価系として妥当であるか、IC50既知阻害剤を用いて検証した。その結果、得られたIC50値は報告値と同等であり、本試験で構築した酵素阻害活性評価系の妥当性が示された。

大腸菌発現系を用いて、N末端にHis-tagを付加したNanobodyの発現及び精製を実施した。発現行程では、培養温度について2点、IPTG濃度について3点の条件を比較し、発現培養の条件検討を実施した。精製は、まず金属キレートカラムによる精製を行った後、その溶出画分をプールしてゲル濾過クロマトグラフィーによる最終精製を行い、最終産物とした。

Biacoreを用いて、SPR法による相互作用解析系の構築を試みた。具体的には、酵素を融合させたアプタマーを、抗体を介してSensor Chip Protein LないしSensor Chip CM5に固定化し、タンパク質をアナライトとして相互作用解析を実施して、平衡定数KDおよび速度定数 (ka, kd) の取得を試みた。

提供いただいた5種類のチューブに核酸を一定期間 (1か月と3か月) 保存した。保存液を用いたPCRおよび増幅産物のアガロースゲル電気泳動の画像から保存液中の核酸含有量をチューブ間で比較し、チューブの核酸吸着性の差異を評価した。

動物臓器試料（委託元提供）における抗原膜タンパク質（2種類）の発現量を定量解析するため、精製組換え抗原タンパク質を標準試料とする定量ウェスタンブロッティング（WB）解析法を構築した。得られたWBデータの画像解析により、標的膜タンパク質の臓器中発現量の絶対定量を行った。

抗体医薬として使用される抗体タンパク質（委託元提供）を対象に、薬物・薬物候補となる低分子量化合物2種類（委託元提供）とのコンジュゲーション反応を行い、目的の抗体薬物複合体を調製した。また、調製後の抗体薬物複合体（2種類）に対して、SDS-PAGE、SEC分析（ゲルろ過）、HIC分析（疎水クロマトグラフィー）、およびエンドトキシン濃度測定等による性状解析を行った。

3種類の50mL飼育用チューブ（被験物質を含む寒天培地、被験物質とスクロースを含む寒天培地、何も含まない寒天培地）を用意した。各チューブに野生型のDrosophila melanogaster (ショウジョウバエ) を10匹ずつ入れ、飼育5日後の生存数を確認し、被験物質存在下でショウジョウバエが生存できるかどうかを評価した。

細胞を大量培養し、124本の凍結ストックを作製した。併せて、細胞品質チェック用の培養上清等を調製し、提出した。

昆虫細胞発現系 (バキュロウイルス) を用いてマウスキナーゼ複合体を発現し、アフィニティータグを利用したアフィニティークロマトグラフィーにより調製した。調製キナーゼを用いてキナーゼ活性を測定するにあたり、複数の手法を検討した結果、リン酸化抗原の特異的に認識する抗体を用いたドットブロットアッセイおよびELISAにより検出することができた。試験委託者から供与された化合物を用いてキナーゼ阻害活性を確認し、約8割の化合物で阻害効果が確認された。

ヒトT細胞に対して、抗CD3/CD28抗体およびPD-L1刺激を行い、マーカータンパク質の発現をフローサイトメーター (Flow cytometry) により測定した。

6種の発現系 (大腸菌発現系、pichia酵母発現系、昆虫細胞発現系、CHO細胞発現系、HEK293細胞発現系、コムギ胚芽無細胞合成系) を使用して、GSTタグ融合タンパク質Aおよびその変異体を発現させた。pichia酵母発現系、CHO細胞発現系、HEK293細胞発現系では宿主由来のプロテアーゼによる目的タンパク質の切断がみられたが、大腸菌発現系、昆虫細胞発現系、コムギ胚芽無細胞合成系では、全長GSTタグ融合タンパク質を得ることができた。タンパク質の発現量などから、このタンパク質に関しては、大腸菌発現系が最も適していることを明らかにした。

Hisタグ付加した目的タンパク質の配列を組み込んだプラスミドを用いて大腸菌を形質転換し、培養量1Lで発現培養を実施した。発現誘導はIPTG添加、発現培養条件は16℃で一晩とした。得られた菌体を超音波処理により破砕して上清を回収し、金属キレートカラムによる精製を実施した後、Superdex 75を用いてサイズ排除クロマトグラフィー (SEC) による最終精製を行った。
その結果、数十mgの目的タンパク質を得ることができた。また、SECの溶出画分をSDS-PAGEで解析した結果、目的タンパク質以外のバンドは検出されず、高純度で目的タンパク質を精製できたことが示された

メチル化感受性制限酵素とリアルタイムPCR (qPCR) 法を用いたDNAメチル化定量系を構築した。評価対象DNA領域に対するリアルタイムPCR法による定量系を確立したうえ、制限酵素の処理時間等を検討した。また、同一プレートPCRでのバラツキの範囲、別実施PCRでの再現性、DNAの検出限界等を評価した。

標的遺伝子に対するshRNAを含む2種類のプラスミドと1種類のコントロールshRNAを含むプラスミドを用いて、レンチウイルス粒子を調製した。調製した3種類のレンチウイルスをそれぞれ試験委託者より供与された細胞に感染させ、3種類の標的遺伝子のノックダウン細胞を作製した。

スクロース密度勾配遠心法を用いてヒト培養細胞から80S リボソームを単離した。

ハイスループットスクリーニングに用いる標識 RNA を in vitro 転写反応により 200 µg 程度調製し、指定用量に分注・凍結保存して提出した。試験系の適性度は、対照試験 (陽性対照、陰性対照) の結果により判断した。標識 RNA の精製度は、電気泳動解析、および簡易的な分解活性解析により確認した。

理化学製品の原料製造過程で動物成分が混入する可能性があるため、原料中の動物由来成分の混入を評価した。
原料抽出液を調製し、抽出液中のウシおよびブタCCL2をELISA法により検出した。
各原料検体について、N=4で抽出液を調製し、各抽出液につきN=3でELISAを実施し、各CCL2濃度は検出下限以下であることを確認した。
測定データを報告書にまとめ、原料中にウシおよびブタCCL2は混入していないことを報告した。

お客様からの実験データを元に論文投稿用の figure 作成を行った。
・お客様指定の論文資料を参考にオリジナル作画（ネットワーク図）した。
・約1000種の薬剤投与データ（２パラメータ）を色とサイズで表現した。
・作業は R 言語を含むオープンソースソフトウェアを用いて行った。
・"Materials and Methods"の文案を提供した。

提供サンプルに含まれる光沢剤の含有量の分析方法の調査及びHPLC / UV分析法により測定した。

タンパク質のアミノ酸配列情報から疎水性スコアを算出し、これを当該タンパク質を疎水性相互作用クロマトグラフィーに供した際の溶出時間の予測に利用するための方法について調査・検討した。

シームレスカプセルの製造装置、製法および用途に関する特許情報を収集するとももに、シームレスカプセルの市場規模について調査した。

委託者のシーズ技術のバイオ産業への転用検討の一環として、幹細胞の商業生産技術および知的財産権について調査した。

次亜塩素酸含有錠剤の処方、製法について先願特許を調査した。また、弊社リサーチセンターにて調査した処方情報に基づいた検証試験を実施した。

委託者のシーズ技術である精製・高純度化技術の異分野へ転用検討の一環として、現行の化粧品成分の製法、不純物情報、安全性情報について文献調査を行った。

マイクロ流路を利用した分析装置および診断デバイス、ドロップレットを利用したスクリーニング技術について特許・文献調査を行った。

エラスチンを用いた褥瘡被覆材に関する研究実績、製造実績に関して特許・文献調査を行った。

化学合成殺菌水の添加物概要書の作成補助を行った。

わきが（腋臭症）の専門家リストアップ、およびその専門家が著者となっている文献を調査した。

ろ過後溶液中に含まれる微粒子をカウントする方法や装置について文献調査を行った。

ディスプレイに使用されているフィルムの種類について特許調査を行った。さらに使用されているフィルムが委託者の商品ラインナップのどの製品に該当するかについてカテゴライジング作業を行った。

近赤外線吸収波長、可視光透過率、耐熱温度の各条件値をクリアできる材料について、文献・特許を調査した。

市販の分析カラムおよび分析プロトコルの調査を行った。

標的遺伝子を発現抑制する可能性がある20種類の人工核酸をマウスに投与後、標的臓器における標的遺伝子の発現をリアルタイムPCR法 (qPCR) により解析し、発現抑制能を評価した。加えて、血清中のALT、AST、ALP濃度から忍容性を評価した。

培養細胞で十分なノックダウン効果を示した人工核酸2種類を、用量別にマウスに投与し、標的臓器での標的遺伝子でのノックダウン効率をリアルタイムPCR法 (qPCR)、並びに標的遺伝子に関連する物質量により評価した。また、忍容性を血中ALT、AST、ALPにより評価した。

ブタ皮膚の皮下脂肪を取り除いた後、電動ダーマトームを用いて、ご指定の厚さに加工し、提出した。

動物実験により、手術機器のダメージ評価した。用途が同じでメーカーやモデルが異なる手術機器を使用し、ラット膵臓の一部を切除した。そして、経時的に腹腔内のアミラーゼ活性を測定し、手術によるダメージを評価した。

苦味を示す薬剤を服用時に飲みやすくなるよう甘味剤を添加するため、その添加比率をラットを用いた嗜好性試験により評価した。